युनिव्हर्सल सिक्वेन्सिंग TELL-Seq लायब्ररी
तपशील
- उत्पादनाचे नाव: TELL-SeqTM लायब्ररी सिक्वेन्सिंग किट
- निर्माता: युनिव्हर्सल सिक्वेन्सिंग टेक्नॉलॉजी कॉर्पोरेशन
- सुसंगतता: iSeq 100 वगळता सर्व Illumina अनुक्रम प्रणाली
- अभिप्रेत वापर: केवळ संशोधनाचा वापर, निदान प्रक्रियेसाठी नाही
- पुनरावृत्ती इतिहास: आवृत्ती 7.0, ऑगस्ट 2024
उत्पादन वापर सूचना:
परिचय
TELL-SeqTM लायब्ररीला कोणत्याही इल्युमिना सिक्वेन्सिंग सिस्टमसाठी कस्टम सिक्वेन्सिंग प्राइमर्सची आवश्यकता असते आणि लिंक केलेल्या रीडसाठी आण्विक बारकोड म्हणून वापरला जाणारा 18-बेस इंडेक्स 1 सीक्वेन्स असतो, ज्याचा संपूर्ण क्रम असणे आवश्यक आहे.
किट सामग्री
| घटकाचे नाव | टोपी रंग | एकाग्रता | आवाज (µL) |
|---|---|---|---|
| 1 प्राइमर वाचा | कॅप ब्लॅक | 100M | 50 |
| 2 प्राइमर वाचा | कॅप पांढरा | 100M | 50 |
| अनुक्रमणिका 1 प्राइमर | CAP लाल | 100M | 50 |
| अनुक्रमणिका 2 प्राइमर | कॅप पिवळा | 100M | 50 |
TELL-SeqTM लायब्ररी स्ट्रक्चर आणि सिक्वेन्सिंग स्कीम
- इंडेक्स 1 (I7 इंडेक्स) मध्ये 18-बेस TELL बीड सीक्वेन्स आहेत जे पूर्णपणे क्रमबद्ध असले पाहिजेत.
- निर्देशांक 2 (I5 निर्देशांक) मध्ये s समाविष्ट आहेampलायब्ररीमध्ये वापरल्या जाणाऱ्या le इंडेक्स प्राइमर सीक्वेन्स ampबंधन
- पेअर एंड सिक्वेन्सिंगला किमान वाचन लांबी 2×96 आणि जास्तीत जास्त 2×150 वाचन लांबी आवश्यकतेसह प्राधान्य दिले जाते.
- जेव्हा लायब्ररीमध्ये वेगवेगळे मल्टीप्लेक्स प्राइमर वापरले जातात तेव्हा सिक्वेन्सिंगसाठी लायब्ररी एकत्र जोडल्या जाऊ शकतात ampबंधनाची पायरी.
कस्टम सिक्वेन्सिंग प्राइमर्स
TELL-SeqTM लायब्ररी अनुक्रमित करण्यासाठी कस्टम सिक्वेन्सिंग प्राइमर्स आवश्यक आहेत आणि ते TELL-SeqTM इलुमिना सिक्वेन्सिंग प्राइमर किटमध्ये प्रदान केले जातात.
कस्टम इंडेक्स 2 प्राइमर
एका सानुकूल इंडेक्स 2 प्राइमरची आवश्यकता असते जेव्हा वेगवेगळ्या मल्टीप्लेक्स प्राइमर्ससह एकाधिक TELL-SeqTM लायब्ररी अनुक्रमासाठी एकत्रित केल्या जातात आणि जेव्हा सिक्वेन्सरला i5 इंडेक्स सिक्वेन्सिंग प्राइमरची आवश्यकता असते. सध्या, फक्त MiSeq साठी, कस्टम इंडेक्स 2 प्राइमर आवश्यक नाही.
वारंवार विचारले जाणारे प्रश्न (FAQ)
- प्रश्न: TELL-SeqTM किट निदान प्रक्रियेसाठी वापरता येईल का?
उ: नाही, TELL-SeqTM किट हे केवळ संशोधनासाठी आहे आणि निदान प्रक्रियेसाठी वापरले जाऊ नये. - प्रश्न: पेअर एंड सिक्वेन्सिंगसाठी किमान आणि कमाल वाचन लांबीची आवश्यकता काय आहे?
A: पेअर एंड सिक्वेन्सिंगसाठी किमान वाचन लांबीची आवश्यकता 2×96 आहे आणि कमाल वाचन लांबीची आवश्यकता 2×150 आहे.
TELL-Seq™ लायब्ररी सिक्वेन्सिंग वापरकर्ता मार्गदर्शक
iSeq 100 वगळता सर्व Illumina@ सिक्वेन्सिंग सिस्टमसाठी
फक्त संशोधनासाठी वापरा. निदान प्रक्रियेत वापरण्यासाठी नाही.
दस्तऐवज # 100018 v7.0
ऑगस्ट २०२४
हा दस्तऐवज युनिव्हर्सल सिक्वेन्सिंग टेक्नॉलॉजी कॉर्पोरेशनच्या मालकीचा आहे आणि तो केवळ त्याच्या ग्राहकाच्या वापरासाठी येथे वर्णन केलेल्या उत्पादनांच्या वापरासाठी आहे आणि इतर कोणत्याही हेतूंसाठी नाही.
TELL-Seq™ किटचा योग्य आणि सुरक्षित वापर सुनिश्चित करण्यासाठी या दस्तऐवजातील सूचना योग्यरित्या प्रशिक्षित कर्मचाऱ्यांनी तंतोतंत पाळल्या पाहिजेत.
युनिव्हर्सल सिक्वेन्सिंग तंत्रज्ञान TELL-SEQ™ किटच्या चुकीच्या वापरानंतर उद्भवणारे कोणतेही दायित्व गृहीत धरत नाही.
©2022 युनिव्हर्सल सिक्वेन्सिंग टेक्नॉलॉजी कॉर्पोरेशन. सर्व हक्क राखीव.
TELL-Seq™ युनिव्हर्सल सिक्वेन्सिंग टेक्नॉलॉजी कॉर्पोरेशनचा ट्रेडमार्क आहे. इतर सर्व नावे, लोगो आणि इतर ट्रेडमार्क त्यांच्या संबंधित मालकांची मालमत्ता आहेत.
पुनरावृत्ती इतिहास
| दस्तऐवज # | आवृत्ती | DCR संदर्भ आणि टिप्पणी |
| C01K002 रेव्ह. ए | जानेवारी 2020 | प्रारंभिक प्रकाशन |
| C01K002 रेव्ह. बी | मार्च २०२३ | परिशिष्ट जोडा |
| 100018-USG | 3.0 | NovaSeq v1.5 अभिकर्मक साठी मार्गदर्शक जोडा |
| 100018-USG | 4.0 | नवीनतम NovaSeq साठी तपशीलवार मार्गदर्शन जोडा
अभिकर्मक |
| 100018-USG | 5.0 | NextSeq 1000/2000 प्रणालीसाठी मार्गदर्शक जोडा |
| 100018-USG | 6.0 | 96 मल्टीप्लेक्स प्राइमर्स (सी-सिरीज) माहिती जोडा |
| 100018-USG | 7.0 | 384 मल्टीप्लेक्स प्राइमर (C,D,E,F-मालिका) जोडा
माहिती इंडेक्स 2 प्राइमर माहिती अपडेट करा |
परिचय
Illumina® अनुक्रमणिका प्रणालीवर कोणतीही अनुक्रमित पेअर-एंड TELL-Seq™ लायब्ररी कशी चालवायची हे हा प्रोटोकॉल स्पष्ट करतो.
TELL-Seq™ लायब्ररी† कोणत्याही इलुमिना सिक्वेन्सिंग सिस्टीमसाठी कस्टम सिक्वेन्सिंग प्राइमर्स आवश्यक आहे आणि लिंक केलेल्या रीडसाठी आण्विक बारकोड म्हणून वापरला जाणारा 18-बेस इंडेक्स 1 सीक्वेन्स आहे, ज्याचा संपूर्ण क्रम असणे आवश्यक आहे.
किट सामग्री
TELL-Seq™ Illumina® सिक्वेन्सिंग प्राइमर किट (PN 100004)
TELL-Seq™ Illumina® सिक्वेन्सिंग प्राइमर किट, HT (PN 100013)
TELL-Seq™ लायब्ररी स्ट्रक्चर आणि सिक्वेन्सिंग योजना
इंडेक्स 1 (म्हणजे, I7 इंडेक्स) मध्ये 18-बेस TELL बीड सीक्वेन्स आहेत, ज्याचा संपूर्ण क्रम असणे आवश्यक आहे. इंडेक्स 2 (म्हणजे, I5 इंडेक्स) मध्ये 8-बेस (टी-सिरीज) किंवा 10-बेस (सी-सिरीज) s समाविष्ट आहेतampलायब्ररीमध्ये वापरल्या जाणाऱ्या le इंडेक्स प्राइमर सीक्वेन्स ampliification पेअर एंड सिक्वेन्सिंगला प्राधान्य दिले जाते. किमान वाचन लांबीची आवश्यकता 2×96 आहे; कमाल वाचन लांबीची आवश्यकता 2×150 आहे.
Exampसायकल चार्टनुसार इलुमिना® सिक्वेन्सिंग % बेस
Illumina® सिक्वेन्सिंग मार्गदर्शक तत्त्व
- Illumina® सिक्वेन्सिंग प्लॅटफॉर्म विशिष्ट एकाग्रता आणि आवाजानुसार TELL-Seq™ लायब्ररी सौम्य करा.
- जेव्हा लायब्ररीमध्ये भिन्न मल्टीप्लेक्स प्राइमर वापरले जातात तेव्हा लायब्ररी अनुक्रमासाठी एकत्रित केल्या जाऊ शकतात ampबंधनाची पायरी.
- TELL-Seq™ लायब्ररी अनुक्रमित करण्यासाठी कस्टम सिक्वेन्सिंग प्राइमर्स आवश्यक आहेत आणि TELL-Seq™ इलुमिना सिक्वेन्सिंग प्राइमर किटमध्ये प्रदान केले आहेत.
- हे कस्टम सिक्वेन्सिंग प्राइमर्स कस्टम प्राइमर्ससाठी निर्दिष्ट विहिरींमध्ये लोड केले जाऊ शकतात. वैकल्पिकरित्या, जेव्हा Illumina® PhiX कंट्रोल लायब्ररी अनुक्रमणिका रनमध्ये स्पाइक केली जाते तेव्हा ते संबंधित मानक Illumina® सिक्वेन्सिंग प्राइमर विहिरींमध्ये देखील लोड केले जाऊ शकतात.
- कस्टम इंडेक्स 2 प्राइमर फक्त तेव्हाच आवश्यक असतो जेव्हा वेगवेगळ्या मल्टीप्लेक्स प्राइमर्ससह एकाधिक TELL-Seq™ लायब्ररी अनुक्रमासाठी एकत्रित केल्या जातात आणि जेव्हा सिक्वेन्सरला i5 इंडेक्स सिक्वेन्सिंग प्राइमरची आवश्यकता असते. सध्या फक्त MiSeq साठी, कस्टम इंडेक्स 2 प्राइमर आवश्यक नाही. तसेच HiSeq 2000/2500 आणि NovaSeq v1 reagents सारख्या समर्थित नसलेल्या प्रणालींसाठी, कस्टम इंडेक्स 2 प्राइमर आवश्यक नाही.
- सिक्वेन्सिंग सिस्टमच्या आधारावर प्रदान केलेल्या सिक्वेन्सिंग प्राइमर्सचे प्रमाण बदलून किमान क्रमवारी धावा केल्या जाऊ शकतात.
| अनुक्रम प्रणाली | कस्टम इंडेक्स 2 प्राइमर आवश्यक आहे का? |
| NovaSeq X/X Plus | होय |
| NovaSeq 6000 | होय |
| HiSeq 3000/4000 | होय |
| NextSeq | होय |
| MiSeq | नाही |
| MiniSeq | होय |
Exampले एसampMiSeq प्रणालीसाठी le शीट
खाली एक माजी आहेampले एसamp2-सायकल इंडेक्स 146 (म्हणजे I18 इंडेक्स) आणि 1-सायकल किंवा 7-बेस (सी-सिरीज) इंडेक्स 8 (म्हणजे, I10 इंडेक्स) रीड 2 साठी सानुकूल सिक्वेन्सिंग प्राइमर्स वापरून 5×1 पीई रनसाठी le शीट , इंडेक्स 1 आणि रीड 2 जे कस्टम सिक्वेन्सिंग प्राइमर विहिरींमध्ये लोड केले जातील. कारण MiSeq फ्लो सेल पृष्ठभागावर P5 प्राइमर वापरते कारण अनुक्रमणिका 2 वाचतो म्हणून, TELL-Seq™ कस्टम इंडेक्स 2 प्राइमर MiSeq प्रणालीसाठी आवश्यक नाही. कोणत्याही एकत्रित लायब्ररीचे डिमल्टीप्लेक्सिंग s वर आधारित असेलample निर्देशांक (म्हणजे, निर्देशांक 2). सिक्वेन्सिंग रन पूर्ण झाल्यानंतर त्यावर TELL-रीड विश्लेषण पाइपलाइनद्वारे स्वतंत्रपणे प्रक्रिया केली जाईल.
Illumina® अनुक्रम वाचन लांबी शिफारस
- पेअर एंड सिक्वेन्सिंगची शिफारस केली जाते.
- TELL-Seq™ लायब्ररी इंडेक्स 1 हा 18-बेस आहे, इंडेक्स 2 हा 8-बेस (टी-सिरीज) किंवा 10-बेस (सी-सिरीज) आहे. स्टँडर्ड इलुमिना ड्युअल इंडेक्ससाठी एकूण 26-बेसच्या तुलनेत दोन्ही इंडेक्ससाठी एकूण 28-बेस (टी-सिरीज) किंवा 16-बेस (सी-सिरीज) आहेत.
- TELL-Seq™ लायब्ररी अनुक्रमणिका अनुक्रमित करण्यासाठी आवश्यक असलेली अतिरिक्त 10-सायकल रीड 1 मधून वजा करणे आवश्यक आहे आणि 2 अनुक्रमणिका समान रीतीने वाचणे आवश्यक आहे. इलुमिना सिक्वेन्सिंग अभिकर्मक 2 अतिरिक्त चक्रांची हमी देत असल्याने, रीड 4 साठी 1-सायकल आणि रीड 4 साठी 2-सायकल अनुक्रमे वजा करणे आवश्यक आहे.
- ड्युअल इंडेक्स रनसाठी 2×96 PE ते 2×146 PE अशी शिफारस केलेली अनुक्रम लांबी आहे; एका s साठी 2×100 PE ते 2×150 PEampनिर्देशांक 2 वाचण्याची गरज नसताना चालवा.
अनुक्रम खोली विचार
- टेल बीड कव्हरेज मिळविण्यासाठी पुरेशी अनुक्रम खोली आवश्यक आहे. लायब्ररीमध्ये अधिक TELL मणी वापरले जातात ampTELL-Seq™ लायब्ररी व्युत्पन्न करण्यासाठी lification, इच्छित अनुक्रम खोली मिळविण्यासाठी अधिक अनुक्रम वाचन आवश्यक असेल. तथापि, लायब्ररीसाठी कमी TELL मणी वापरले जातात ampलाइफिकेशन, लायब्ररीची जटिलता जितकी कमी असेल तितकी कमी असेल, ज्यामुळे अनुक्रम वाचनाचा उच्च डुप्लिकेशन दर होऊ शकतो. वापरलेले TELL Beads आणि TELL-Seq™ लायब्ररीची आवश्यक जटिलता यांच्यातील शिल्लक जीनोम आकार आणि अनुप्रयोगावर अवलंबून असू शकते.
- डी नोव्हो असेंब्ली ऍप्लिकेशनसाठी, एस चे किमान 60x जीनोम कव्हरेजample ची सर्वसाधारणपणे शिफारस केली जाते. तथापि, लायब्ररीसाठी वापरल्या जाणाऱ्या TELL बीड्सच्या प्रमाणानुसार कमी अनुक्रमिक कव्हरेज देखील पुरेसे असू शकते. ampliification आणि TELL-Seq™ लायब्ररी जटिलता.
- मानवी टप्प्यासाठी, किमान 500 दशलक्ष क्लस्टर प्रति s वाचतातample जे ~40x खोली आहे अशी शिफारस केली जाते.
- लक्ष्यित अनुक्रमासाठी, किमान 100x कव्हरेजची शिफारस केली जाते.
लायब्ररी मल्टीप्लेक्स प्राइमर इंडेक्स सिक्वेन्स (म्हणजे, इंडेक्स 2 वाचा): टी-मालिका (8-बेस)
| लायब्ररी मल्टिप्लेक्स
प्राइमर (टी-मालिका) |
एस साठीample शीट MiSeq | एस साठीampले शीट नोव्हासेक,
NovaSeq X, NextSeq, MiniSeq |
| T501 | TGAACTT | AAGGTTCA |
| T502 | TGCTAAGT | ACTTAGCA |
| T503 | TGTTCTCT | AGAGAACA |
| T504 | TAAGACAC | GTGTCTTA |
| T505 | CTAATCGA | TCGATTAG |
| T506 | CTAGAACA | TGTTCTAG |
| T507 | TAAGTTCC | GGAACTTA |
| T508 | TAGACCTA | TAGGTCTA |
| T509 | CATCCGAA | TTCGGATG |
| T510 | TTATGAGT | ACTCATAA |
| T511 | AGAGGCGC | GCGCCTCT |
| T512 | TAGCCGCG | CGCGGCTA |
| T513 | ACGAATAA | TTATTCGT |
| T514 | TTCGTAGG | CCTACGAA |
| T515 | GATCTGCT | AGCAGATC |
| T516 | CGCTCCGC | GCGGAGCG |
| T517 | AGGCTATA | TATAGCCT |
| T518 | GCCTCCTAT | ATAGAGGC |
| T519 | AGGATAGG | CCTATCCT |
| T520 | TCAGAGCC | GGCTCTGA |
| T521 | CTTCGCCT | AGGCGAAG |
| T522 | तागट्टा | TAATCTTA |
| T523 | AGTAAGTA | TACTTACT |
| T524 | GACTTCCT | AGGAAGTC |
लायब्ररी मल्टीप्लेक्स प्राइमर इंडेक्स सिक्वेन्स (म्हणजे इंडेक्स 2 वाचा): C,D,E,F-मालिका (10-बेस)
| लायब्ररी मल्टीप्लेक्स प्राइमर (सी-मालिका) | एस साठीample शीट MiSeq | एस साठीample शीट NovaSeq, NovaSeq X, NextSeq, MiniSeq |
| C501 | ACGTACGTAC | GTACGTACGT |
| C502 | CATGCATGCA | TGCATGCATG |
| C503 | GTACGTACGT | ACGTACGTAC |
| C504 | TGCATGCATG | CATGCATGCA |
| C505 | ATGCTGATCA | TGATCAGCAT |
| C506 | CACAGCTGTG | CACAGCTGTG |
| C507 | GCTGATAGC | GCTGATAGC |
| C508 | TGATCAGCAT | ATGCTGATCA |
| C509 | ATTCAATACT | AGTATTGAAT |
| C510 | CTAGCGCTAG | CTAGCGCTAG |
| C511 | GCTAGTAGTA | TACTACTAGC |
| C512 | TCCAATCAAG | CTTGATTGGA |
| C513 | AATTGCTG | CAGCAATATT |
| C514 | CGTCGTTACG | CGTAACGACG |
| C515 | GATTGATTCC | GGAATCAATC |
| C516 | TCTAACAATG | CATTGTTAGA |
| C517 | AGAATTGTCA | TGACAATTCT |
| C518 | CTCAGCAATT | AATTGCTGAG |
| C519 | GGTCCCTTGTC | GACAAGGACC |
| C520 | AGGCCTGACA | TGTCAGGCCT |
| C521 | CTCCTAGTGG | CCACTAGGAG |
| C522 | GGTTACAGCT | AGCTGTAACC |
| C523 | CTGATTGGCG | CGCCAATCAG |
| C524 | ATTGGTTAGA | TCTAACCAAT |
| C525 | CCATTCAACT | AGTTGAATGG |
| C526 | CAGTATTGAC | GTCAATACTG |
| C527 | GAGTCCTCAA | TTGAGGACTC |
| C528 | AGCTACTACT | AGTAGTAGCT |
| C529 | TAGCTAGCGC | GCGCTAGCTA |
| C530 | GATGCAACAC | GTGTTGCATC |
| C531 | CCTCAGTACA | TGTACTGAGG |
| C532 | CGGTAATTCA | TGAATTACCG |
| C533 | CGCAATGGCT | AGCCATTGCG |
| C534 | GTACGTTGAA | TTCAACGTAC |
| C535 | TTGATCAGTA | TACTGATCAA |
| C536 | GGCCTAACAA | TTGTTAGGCC |
| C537 | GTTGTTGGAA | TTCCAACAAC |
| C538 | TACGTTGGAC | GTCCAACGTA |
| C539 | ACACCATGCA | TGCATGGTGT |
| C540 | GCAATAGTAC | GTACTATTGC |
| C541 | ACGCAGCCAG | CTGGCTGCGT |
| C542 | CGAGTTGACG | CGTCAACTCG |
| C543 | CGTGGCTGAA | TTCAGCCACG |
| C544 | TCTCAAGGAC | जीटीसीसीटीटीगागा |
| C545 | CCTAGGCACT | AGTGCCTAGG |
| C546 | CTGCGGTAAT | ATTACCGCAG |
| C547 | GGCACTACCA | TGGTAGTGCC |
| C548 | GCTCAATCAA | TTGATTGAGC |
| C549 | AGGCACACAAC | GTGTGTGCCT |
| C550 | CCGGCAAGA | TCTTGCCAGG |
| C551 | TAATTGGTAG | CTACCAATTA |
| C552 | GCCAACAAGT | ACTTGTTGGC |
| C553 | ATGGCTTATA | TATAAGCCAT |
| C554 | GCATGGCCTT | AAGGCCATGC |
| C555 | ACAATACTGG | CCAGTATTGT |
| C556 | GGATTGGACT | AGTCCAATCC |
| C557 | ACTGTACTAT | ATAGTACAGT |
| C558 | CAGCTGTGAG | CTCACAGCTG |
| C559 | CTTGAGGACC | GGTCCTCAAG |
| C560 | GGTACAATAG | CTATTGTACC |
| C561 | CTGACTA | TAGTAGटीसीएजी |
| C562 | TCACCATGG | CCATGGTTGA |
| C563 | ATTATAACCG | CGGTTATAAT |
| C564 | ACTAGTCCTT | AAGGACTAGT |
| C565 | ACTTGGACGT | ACGTCCAAGT |
| C566 | ATGGTTAGGA | टीसीसीटीएसीसीएटी |
| C567 | ATGGTACCAA | TTGGTACCAT |
| C568 | GAATTGACTC | GAGTCAATTC |
| C569 | AGCAACCAGG | CCGGTTGCT |
| C570 | TACTGTGCTG | CAGCACAGTA |
| C571 | CAACAACGTC | GACGTTGTTG |
| C572 | कॅगTAGCGCT | AGCGCTACTG |
| C573 | ATTACCAATC | GATTGGTAAT |
| C574 | TAAGGACCGC | GCGGTCCTTA |
| C575 | ACACGTACCG | CGGTACGTGT |
| C576 | CAACGTTGTT | AACAACGTTG |
| C577 | ATTGTGCTGA | TCAGCACAAT |
| C578 | GTACCAACAG | CTGTTGGTAC |
| C579 | TTGTCAAGGA | TCCTTGACAA |
| C580 | CTTGTACGTA | TACGTACAAG |
| C581 | TGCCTTGTAA | TTACAAGGCA |
| C582 | TAGTAGCTTA | TAAGCTACTA |
| C583 | GACCGCAATG | CATTGCGGTC |
| C584 | CTACTAGCTT | AAGCTAGTAG |
| C585 | AGCACACGTT | AACGTGTGCT |
| C586 | TGTTATAGC | GCTTATAACA |
| C587 | GTTGCCAAGT | ACTTGGCAAC |
| C588 | CTGGCAACCG | CGGTTGCCAG |
| C589 | TTAGजीसीसीटीटीए | TAAGGCCTAA |
| C590 | CGCAGCACAG | CTGTGCTGCG |
| C591 | CTAGGCACAA | TTGTGCCTAG |
| C592 | TGTTGTACAG | CTGTACAACA |
| C593 | CTAACGTGGC | GCCACGTTAG |
| C594 | GCGTACTGGT | ACCAGTACGC |
| C595 | GGCCTGAATT | AATTCAGGCC |
| C596 | CATGCTCGAG | CTCGAGCATG |
| लायब्ररी मल्टीप्लेक्स प्राइमर (डी-मालिका) | एस साठीample शीट MiSeq | एस साठीample शीट NovaSeq, NovaSeq X, NextSeq, MiniSeq |
| D501 | AGCACTGTAA | TTAAGTGCT |
| D502 | CCGAAGTACT | AGTACTTCGG |
| D503 | GTTACAAGTA | TACTTGTAAC |
| D504 | TGATTGCGTG | CACGCAATCA |
| D505 | ATCTTAGGCA | TGCCTAAGAT |
| D506 | CACGCAAGTT | AACTTGCGTG |
| D507 | GAGCTTAGGA | TCCTAAGCTC |
| D508 | TATTGCTCGA | TCGAGCAATA |
| D509 | AACATCTGAG | CTCAGATGTT |
| D510 | CAACTCAGCA | TGCTGAGTTG |
| D511 | GAACTATATG | CATATAGTTC |
| D512 | TAATAGTCTA | TAGACTATTA |
| D513 | AAGATTGACG | CGTCAATCTT |
| D514 | CACGTAGCCG | CGGCTACGTG |
| D515 | GACTCGATCA | TGATCGAGTC |
| D516 | TAATCCTCGC | GCGAGGATTA |
| D517 | AAGCTCCTGG | CCAGGAAGCTT |
| D518 | CAGATTGTTG | CAACAATCTG |
| D519 | GATGCTATTC | GAATAGCATC |
| D520 | TAATCCTCGC | GCGAGGATTA |
| D521 | AAGTATACCT | AGGTATACTT |
| D522 | कॅगTAGCCAA | TTGGCTACTG |
| D523 | GCAAGGACTC | GAGTCCTTGC |
| D524 | TACTACTGTA | TACAGTAGTA |
| D525 | AATCCTAGCT | AGCTAGGATT |
| D526 | CATTGGCAAG | CTTGCCAATG |
| D527 | GCCTGAGAAT | ATTCTCAGGC |
| D528 | TACTAGCAAG | CTTGCTAGTA |
| D529 | ACAGCTAGTC | GACTAGCTGT |
| D530 | CAACCAGTA | TACTGGTTGG |
| D531 | GCGCTCAATT | AATTGAGCGC |
| D532 | TAGCGCGGAC | GTCCGCGCTA |
| D533 | ACCTATAGTT | AACTATAGGT |
| D534 | CCACGTCAGG | CCTGACGTGG |
| D535 | GCTACGCAAT | ATTGCGTAGC |
| D536 | TAGTTGCTGC | GCAGCAACTA |
| D537 | ACGGTACAAC | GTTGTACCGT |
| D538 | CCGAACTTCG | CGAAGTTCGG |
| D539 | GCTCCTAATT | AATTAGGAGC |
| D540 | TATCCTCGAT | ATCGAGGATA |
| D541 | ACTCGATTCT | AGAATCGAGT |
| D542 | CCGGTAATT | AATTACCAGG |
| D543 | जीसीटीTAGTTGG | CCAACTAAGC |
| D544 | TCAGCAAGGA | TCCTTGCTGA |
| D545 | ACTGGTAGCA | TGCTACCAGT |
| D546 | CGATCAACCT | AGGTTGATCG |
| D547 | GGAAGTAGCA | TGCTACTTCC |
| D548 | TCAGCTGCGG | CCGCAGCTGA |
| D549 | ACTGGTAGCA | TGCTACCAGT |
| D550 | CGATCAACCT | AGGTTGATCG |
| D551 | GGCAAGATGA | TCATCTTGCC |
| D552 | TCCGCCAATG | CATTGGCGGA |
| D553 | AGAATCTTAT | ATAAGATTCT |
| D554 | CGCTAGCAAC | GTTGCTAGCG |
| D555 | GGCCTTATAT | ATATAAGGCC |
| D556 | TCGAATACTA | TAGTATTCGA |
| D557 | AGCAATGGTA | TACCATTGCT |
| D558 | CGGTCTGATC | GATCAGACCG |
| D559 | GGTCGCCAT | ATGGCGGACC |
| D560 | TCGAATACTA | TAGTATTCGA |
| D561 | AGCACTGTAA | TTAAGTGCT |
| D562 | CGTACTACCG | CGGTAGTACG |
| D563 | GGTTCATCGG | CCGATGAACC |
| D564 | TCGGAGCTGC | GCAGCTCCGA |
| D565 | AGGACGTTAG | CTAACGTCCT |
| D566 | CGTTGACAAT | ATTGTCAACG |
| D567 | GTACTGACAC | GTGTCAGTAC |
| D568 | टीसीटीएजीएTAG | CTATCTTAGA |
| D569 | AGTGCTCAAC | GTTGAGCACT |
| D570 | CTAAGAACCT | AGGTTCTTAG |
| D571 | GTATAATTAC | GTAATTATAC |
| D572 | TGATTGCGTG | CACGCAATCA |
| D573 | ATATTCGACG | CGTCGAATAT |
| D574 | CTATAACGAC | GTCGTTATAG |
| D575 | GTCGTTAGGT | ACCTAACGAC |
| D576 | TGCCACTGAT | ATCAGTGGCA |
| D577 | ATCGGCTAAG | CTTAGCCGAT |
| D578 | CTCAAGTTGC | GCAACTTGAG |
| D579 | GTGTGTTCGA | TCGAACACAC |
| D580 | TGCTATAGTC | GACTATAGCA |
| D581 | ATGAGCTATT | AATAGCTCAT |
| D582 | CTCACAACGA | TCGTTGTGAG |
| D583 | TGCTCGATTG | CAATCGAGCA |
| D584 | ATGTTGGACT | AGTCCAACAT |
| D585 | CTGATGTTAG | CTAACATCAG |
| D586 | TGGTAACCAG | CTGGTTACCA |
| D587 | ATTCGAAGTA | TACTTCGAAT |
| D588 | CTTAGCTCCT | AGGAGCTAAG |
| D589 | TGTAATCGAT | ATCGATTACA |
| D590 | CTTGGACTTC | GAAGTCCAAG |
| D591 | TGTACTTGAA | TTCAAGTACA |
| D592 | TTAAGCTCAG | सीटीजीएजीसीटीटीएए |
| D593 | TTACAACCAG | CTGGTTGTAA |
| D594 | TTCTCAGCCA | TGGCTGAGAA |
| D595 | TTGCATGGCT | AGCCATGCAA |
| D596 | TTGGCGGTAC | GTACCGCCAA |
| लायब्ररी मल्टीप्लेक्स प्राइमर (ई-मालिका) | एस साठीample शीट MiSeq | एस साठीample शीट NovaSeq, NovaSeq X, NextSeq, MiniSeq |
| E501 | AGCCACGGTC | GACCGTGGCT |
| E502 | CCGCCTGAGT | ACTCAGGCGG |
| E503 | GTTATATATAC | GGTATATAAC |
| E504 | CTCCTGGCA | TGCCAGGAAG |
| E505 | ATCGAATTGC | GCAATTCGAT |
| E506 | CACGTGTTGT | ACAACACGTG |
| E507 | GAGCTGTGTT | AACACAGCTC |
| E508 | ततचागत | ATCTGTAATA |
| E509 | AACAATGGCG | CGCCATTGTT |
| E510 | CAACTCGCTA | TAGCGAGTTG |
| E511 | GAATTGCTCA | TGAGCAATTC |
| E512 | GTGTGTTCGA | TCGAACACAC |
| E513 | CGATTCGAGC | GCTCGAATCG |
| E514 | GTCAACGTTA | TAACGTTGAC |
| E515 | GACAATCCTA | TAGGATTGTC |
| E516 | टाटकागॅक्ट | AGTCTGATTA |
| E517 | AAGCTATAT | ATATAAGCTT |
| E518 | CATATTGTAA | TTACAATATG |
| E519 | GATAGGACTT | AAGTCCTATC |
| E520 | ATGCTAGGTT | AACCTAGकॅट |
| E521 | GCAAGATTAG | CTAATCTTGC |
| E522 | CAGCTGTATA | TATACAGCTG |
| E523 | GCAAGTCTAA | TTAGACTTGC |
| E524 | TACTAGCAAG | CTTGCTAGTA |
| E525 | AATACTGTTA | TAACAGTATT |
| E526 | CATATCTGAC | GTCAGATATG |
| E527 | GCCACTAAGG | CCTTAGTGGC |
| E528 | CTGGCAATTC | GAATTGCCAG |
| E529 | ACAATAGGCG | CGCCTATTGT |
| E530 | CCATGCTAAG | CTTAGCATGG |
| E531 | GCGAGCGATC | GATCGCTCGC |
| E532 | TAGGTAGTTC | GAACTACTA |
| E533 | ACCTTGGACC | GGTCCAAGGT |
| E534 | TGACTAATAC | GTATTAGTCA |
| E535 | GCTATATCTG | कॅगाटाTAGC |
| E536 | TCTAGTTCAG | CTGAACTAGA |
| E537 | ACGGTTGAGA | TCTCAACCGT |
| E538 | CTGATTCCGG | CCGGAATCAG |
| E539 | TGGTAACCAG | CTGGTTACCA |
| E540 | GACTCAGACA | TGTCTGAGTC |
| E541 | TTAGCCAATA | TATTGGCTAA |
| E542 | CCTTAAGGCG | CGCCTTTAAGG |
| E543 | CGTAGCAATC | GATTGCTACG |
| E544 | CATGGCTAAT | ATTAGCCATG |
| E545 | ACTCGACAAT | ATTGTCGAGT |
| E546 | CGAAGTCTAGG | CCTAGACTCG |
| E547 | GGACTCAGCT | AGCTGAGTCC |
| E548 | TCAGCAAGGA | TCCTTGCTGA |
| E549 | CGATTCCTTA | TAAGGAATCG |
| E550 | ATTAGGCAAT | ATTGCCTAAT |
| E551 | TTGTCGAAGG | CCTTCGACAA |
| E552 | TCCAAGTAGC | GCTACTTGGA |
| E553 | AGATAGTCCG | CGGACTATCT |
| E554 | CGCTAACATA | TATGTTAGCG |
| E555 | GGCTAATTGT | ACAATTAGCC |
| E556 | AGGTACGTCA | TGACGTACCT |
| E557 | TTCCAAGTTC | GAACTTGGAA |
| E558 | CGGAGCTCCG | CGGAGCTCCG |
| E559 | GGTACTAATA | TATTAGTACC |
| E560 | TCGAAGGCAA | TTGCCTTCGA |
| E561 | CTCCTTGATG | CATCAAGGAG |
| E562 | GCAATTCCGG | CCGGAATTGC |
| E563 | ACTACGCAGC | GCTGCGTAGT |
| E564 | AGGAATGGCC | GGCCATTCCT |
| E565 | AGGTTAGकॅट | ATGCTAACCT |
| E566 | CGTCCTAGAC | GTCTAGGACG |
| E567 | GCGTGGCAAT | ATTGCCACGC |
| E568 | TCTGATCGAC | GTCGATCAGA |
| E569 | AGTTGTCAGG | CCTGACAACT |
| E570 | CTACGCCAAT | ATTGGCGTAG |
| E571 | GTAGTTGCGT | ACGCAACTAC |
| E572 | TGAGCGCTAT | ATAGCGCTCA |
| E573 | ATACCTTAGT | ACTAAGGTAT |
| E574 | GCACACCATT | AATGGTGTGC |
| E575 | GTCTAAGGAG | CTCCTTAGAC |
| E576 | CATTCCGCGG | CCGCGGAATG |
| E577 | GCGTACCTAG | CTAGGTACGC |
| E578 | CTCAATAGCA | टीजीसीटीटीटीगॅग |
| E579 | GTGCTAAGCC | GGCTTAGCAC |
| E580 | TGCCACTATC | GATAGTGGCA |
| E581 | GCTGTTGAAT | ATTCAACAGC |
| E582 | CGGCTAATCC | GGATTAGCCG |
| E583 | AACTACCGCA | TGCGGTAGTT |
| E584 | ATGCATCAAG | CTTGATGCAT |
| E585 | CTGACTTGCA | TGCAAGTCAG |
| E586 | TGGTACCTTAT | ATAGGTACCA |
| E587 | ATTAGCTAAC | GTTAGCTAAT |
| E588 | TGGTACCTTAT | ATAGGTACCA |
| E589 | TGTTGCTACC | GGTAGCAACA |
| E590 | CTTATATAAG | CTTATATAAG |
| E591 | TCAAGTCTGT | ACAGACTTGA |
| E592 | TGAGCGCTAT | ATAGCGCTCA |
| E593 | TTAGGCGTAC | GTACGCCTAA |
| E594 | TTCTCATCAG | CTGATGAGAA |
| E595 | CTAGGTATTG | CAATACCTAG |
| E596 | TTGCTGACTA | TAGTCAGCAA |
| लायब्ररी मल्टिप्लेक्स प्राइमर (एफ-मालिका) | एस साठीample शीट MiSeq | एस साठीample शीट NovaSeq, NovaSeq X, Next Seq, MiniSeq |
| F501 | AGCCAGTAGC | GCTACTGGCT |
| F502 | CCGATGAGTT | AACTCATCGG |
| F503 | GTTCAACTTC | GAAGTTGAAC |
| F504 | TTGAGCATCA | TGATGCTCAA |
| F505 | ATCAACAGTG | CACTGTTGAT |
| F506 | CACACGGTAG | CTACCGTGTG |
| F507 | GAGGATTGCT | AGCAATCCTC |
| F508 | TATCTTGGCC | GGCCAAGATA |
| F509 | AACTAGTGGC | GCCACTAGTT |
| F510 | CAATCCTGGT | ACCAGGATTG |
| F511 | GAAGGTTACG | CGTAACCTTC |
| F512 | CTAAGAACCT | AGGTTCTTAG |
| F513 | CACACGGTAG | CTACCGTGTG |
| F514 | AATTAGTCTG | CAGACTATAT |
| F515 | GACCGTGTTA | TAACACGGTC |
| F516 | TAATTCGAGG | CCTCGAATTA |
| F517 | AAGATTGACG | CGTCAATCTT |
| F518 | CAACTCGCTA | TAGCGAGTTG |
| F519 | GATTCGAACT | AGTTCGAATC |
| F520 | GCCTTGAGTT | AACTCAAGGC |
| F521 | CACAGATTAG | CTAATCTGTG |
| F522 | CAGCTAGGCC | GGCCTAGCTG |
| F523 | GCAAGGTATA | TATACTTGC |
| F524 | TACCTAGGTA | TACCTAGGTA |
| F525 | AATCCTTGAA | TTCAAGGATT |
| F526 | CATCGAACCT | AGGTTCGATG |
| F527 | GCCTGCGTAA | TTACGCAGGC |
| F528 | CATCGAACCT | AGGTTCGATG |
| F529 | ACAGTGCCAT | ATGGCACTGT |
| F530 | CCAACTATTG | CAATAGTTGG |
| F531 | GCGTACCGCA | TGCGGTACGC |
| F532 | TAGGAGCGAT | ATCGCTCCTA |
| F533 | ACCAATTGGT | ACCAATTGGT |
| F534 | AATACTGTTA | TAACAGTATT |
| F535 | GCTGTTGAAT | ATTCAACAGC |
| F536 | TTACAACCAG | CTGGTTGTAA |
| F537 | ACGTCAAGTC | GACTTGACGT |
| F538 | CAATTCAATG | CATTGAATTG |
| F539 | TGAATTCAGC | GCTGAATTCA |
| F540 | ACGTACAGCT | AGCTGTACGT |
| F541 | TGACTACCAT | एटीजीजीTAGTCA |
| F542 | CCGGTGTGA | TCACACCAGG |
| F543 | GACTAATCGC | GCGATTAGTC |
| F544 | ACGTTAGTGC | GCACTAACGT |
| F545 | ACTCGATTCT | AGAATCGAGT |
| F546 | CGACAAGATT | AATCTTGTCG |
| F547 | GGAATTGGCT | AGCCAATTCC |
| F548 | TCACAGCCGA | TCGGCTGTGA |
| F549 | CTGTACTGTA | टॅकगटाकॅग |
| F550 | TCGCTCGAGG | CCTCGAGCGA |
| F551 | ACCTTAGCAA | TTGCTAAGGT |
| F552 | TCCGGACTAC | GTAGTCCGGA |
| F553 | AGAACTTGCA | TGCAAGTTCT |
| F554 | CGCAGGACTT | AAGTCCTGCG |
| F555 | GGCAAGATGA | TCATCTTGCC |
| F556 | GCCTAGCGCG | CGCGCTAGGC |
| F557 | GACATCGCTA | TAGCGATGTC |
| F558 | CGGCTAATCC | GGATTAGCCG |
| F559 | GGTTGAAGCTT | AAGCTCAACC |
| F560 | TCGCTCAGGC | GCCTGAGCGA |
| F561 | GCTGATTATA | TATAATCAGC |
| F562 | GCGCTAGटीसीसी | GGACTAGCGC |
| F563 | TATGTCTGAA | TTCAGACATA |
| F564 | AAGCTATAT | ATATAAGCTT |
| F565 | AGGAATGGCC | GGCCATTCCT |
| F566 | CGTAGCGCGC | GCGCGCTACG |
| F567 | GCCTGCGTAA | TTACGCAGGC |
| F568 | TCTTAGCGAT | ATCGCTAAGA |
| F569 | AGTTCTAAGA | TCTTAGAACT |
| F570 | CTAGGTATTG | CAATACCTAG |
| F571 | GTAGTACTAC | GTAGTACTAC |
| F572 | TGACAAGTAG | CTACTTGTCA |
| F573 | ATAGTCTGAG | CTCAGACTAT |
| F574 | CTGTGTTACA | TGTAACACAG |
| F575 | GTCTAGCCAC | GTGGCTAGAC |
| F576 | AATCAAGGTT | AACCTTGATT |
| F577 | CATAATTATG | CATAATTATG |
| F578 | CTCGAGCTAT | ATAGCTCGAG |
| F579 | GTGCCTGATG | CATCAGGCAC |
| F580 | TGCTCGATTG | CAATCGAGCA |
| F581 | GATTCGAACT | AGTTCGAATC |
| F582 | TCGTTGAGGA | TCCTCAACGA |
| F583 | AGCCAGGCGT | ACGCCTGGCT |
| F584 | ATGTCGATT | AATCTGACAT |
| F585 | CTGTATATAC | GTATATACAG |
| F586 | TGGTGTCAAC | GTTGACACCA |
| F587 | ATTGCATGCT | AGCATGCAAT |
| F588 | AGTATTCATA | ताटगाटाक्ट |
| F589 | TGTAATTCG | CGGAATTACA |
| F590 | CTCCTGGCA | TGCCAGGAAG |
| F591 | TCCGCGCGGA | TCCGCGCGGA |
| F592 | CACTGTTCGG | CCGAACAGTG |
| F593 | TTAGCCAATA | TATTGGCTAA |
| F594 | TTCGAGCTGA | TCAGCTGAA |
| F595 | GTACCGCGCG | CGCGCGGTAC |
| F596 | TTGAGCATCA | TGATGCTCAA |
परिशिष्ट
Illumina® सिक्वेन्सिंग प्राइमर्समध्ये TELL-Seq™ कस्टम प्राइमर्स स्पाइकिंग
TELL-Seq™ लायब्ररींना इलुमिना सिक्वेन्सिंग प्लॅटफॉर्मसाठी कस्टम सिक्वेन्सिंग प्राइमर्सची आवश्यकता असते. PhiX कंट्रोल लायब्ररी किंवा TELL-Seq™ लायब्ररीसह इतर मानक इल्युमिना लायब्ररी अनुक्रमणिकेमध्ये समाविष्ट करताना मानक इल्युमिना सिक्वेन्सिंग प्राइमर्समध्ये सानुकूल TELL-Seq™ इल्युमिना सिक्वेन्सिंग प्राइमर्स स्पाइकिंग (किंवा एकत्र करणे) आवश्यक आहे.
टीप: TELL-Seq™ इंडेक्स 1 रीडमध्ये 18-बेस आहे आणि 18-सायकल सिक्वेन्सिंग आवश्यक आहे; इंडेक्स 2 रीडमध्ये टी-सिरीज प्राइमरसाठी 8-बेस आणि सी-सिरीज प्राइमरसाठी 10-बेस आहेत.
इलुमिना प्राइमर्समध्ये कस्टम प्राइमर्स वाढवण्याची प्रक्रिया
- प्रत्येक प्लॅटफॉर्मसाठी कार्ट्रिजची स्थिती, एकूण व्हॉल्यूम आणि सानुकूल प्राइमर्सची अंतिम एकाग्रता खालील सारण्यांमध्ये प्रदान केली आहे.
- कार्ट्रिजमधील कस्टम प्राइमरच्या अंतिम एकाग्रतेच्या आधारावर इलुमिना प्राइमर कार्ट्रिज स्थितीत जोडण्यासाठी सानुकूल प्राइमरच्या व्हॉल्यूमची गणना करा.*
- सानुकूल प्राइमरमध्ये स्पाइक केल्यानंतर, विंदुक एकूण व्हॉल्यूमच्या निम्म्यापर्यंत समायोजित करा आणि पूर्णपणे मिसळण्यासाठी हळूवारपणे वर आणि खाली पाच वेळा पिपेट करा.
- MiSeq, MiniSeq, NextSeq आणि NovaSeq प्लॅटफॉर्मसाठी, s मध्ये “कस्टम प्राइमर” बॉक्स स्थिती तपासू नकाample शीट किंवा रन सेटअप दरम्यान.
* विहिरीत किती सानुकूल प्राइमर वाढवायचे याची गणना करण्यासाठी, (C1)*(V1) = (C2)*(V2) समीकरण वापरा जेथे:
- C1 = 100μM (100μM उच्च एकाग्रता प्राइमर स्टॉक वापरताना, अंतिम व्हॉल्यूमसाठी लहान अतिरिक्त व्हॉल्यूम नगण्य आहे).
- V1 = सानुकूल प्राइमरच्या आवाजाचे निराकरण करा
- C2 = V2 खालील तक्त्यावरून शिफारस केलेले सानुकूल प्राइमर अंतिम एकाग्रता = खालील तक्त्यांमध्ये इलुमिना प्राइमरचे एकूण खंड
ExampMiSeq प्लॅटफॉर्मसाठी le
100μM * V1 = 0.5μM * 680μL V1 = 3.4 μl
महत्त्वाची सूचना: खालील मार्गदर्शक तत्त्वे सध्याच्या प्राइमर व्हॉल्यूमवर आधारित आहेत. अचूकता सुनिश्चित करण्यासाठी, सेटअपसह पुढे जाण्यापूर्वी काडतूसमधील एकूण प्राइमर व्हॉल्यूम पिपेटने मोजा.
प्रत्येक Illumina® सीक्वेन्सरमध्ये भिन्न अंतिम एकाग्रता आणि एकूण खंड असतो म्हणून योग्य प्रमाणात TELL-Seq™ Illumina® सिक्वेन्सिंग प्राइमर्स थेट जोडले जात आहेत याची खात्री करण्यासाठी खालील दस्तऐवज पहा.
*टीप: रीड 1 आणि रीड 2 प्राइमर्ससह इंडेक्स 1 आणि इंडेक्स 2 अनेकदा अभिकर्मक काडतूस विहिरीमध्ये एकत्र केले जातात. कृपया खात्री करा की विहिरीसाठी अंतिम एकाग्रता सानुकूल प्राइमर प्रत्येक प्राइमरचा आहे (उदा. अनुक्रमणिका 0.3 चे 1μM आणि अनुक्रमणिका 2 एकूण 0.6μM साठी)
<https://knowledge.illumina.com/library-preparation/general/library-preparation-general-reference_material-list/000001542>
खाली आहेत
iSeq100
iSeq100 कार्ट्रिजच्या बांधकामामुळे, सानुकूल प्राइमर लोड करणे आणि वापरणे शक्य नाही.
MiniSeq
NextSeq
MiSeq
* सानुकूल इंडेक्स 2 (i5) प्राइमरसाठी कोणताही पर्याय नाही कारण टेम्पलेट फ्लो सेलच्या पृष्ठभागावर कलम केलेले P5 प्राइमर वापरत आहे.
HiSeq 1000/2000 - 1500/2300 
* सानुकूल इंडेक्स 2 (i5) प्राइमरसाठी कोणताही पर्याय नाही कारण टेम्पलेट फ्लो सेलच्या पृष्ठभागावर कलम केलेले P5 प्राइमर वापरत आहे.
HiSeq 3000/4000
NovaSeq v1.0 उपभोग्य वस्तू
| किट आवृत्ती | इलुमिना प्राइमर (नाव) | काडतूस स्थिती | एकूण खंड (mL) | सानुकूल प्राइमर अंतिम एकाग्रता (µM) |
|
SP 100/200/300/500 सायकल |
वाचा 1 (BP10) | 24 | 4 | 0.3 |
| इंडेक्स 1 (i7) (BP14)* | 23 | 5 | 0.3 | |
| वाचा 2 (BP11) | 13 | 2 | 0.3 | |
|
S1 आणि S2 100/200/300 चक्र |
वाचा 1 (BP10) | 24 | 4 | 0.3 |
| इंडेक्स 1 (i7) (BP14)* | 23 | 5 | 0.3 | |
| वाचा 2 (BP11) | 13 | 2 | 0.3 | |
|
S4 200/300 सायकल |
वाचा 1 (BP10) | 24 | 7.3 | 0.3 |
| इंडेक्स 1 (i7) (BP14)* | 23 | 5 | 0.3 | |
| वाचा 2 (BP11) | 13 | 3.5 | 0.3 |
* सानुकूल इंडेक्स 2 (i5) प्राइमरसाठी कोणताही पर्याय नाही कारण टेम्पलेट फ्लो सेलच्या पृष्ठभागावर कलम केलेले P5 प्राइमर वापरत आहे.
NovaSeq v1.5 उपभोग्य वस्तू
| किट आवृत्ती | इलुमिना प्राइमर (नाव) | काडतूस स्थिती | एकूण खंड (mL) | सानुकूल प्राइमर अंतिम एकाग्रता (µM) |
|
SP 100/200/300/500 सायकल |
वाचा 1 (VP10) | 24 | 4 | 0.3 |
| इंडेक्स 1 (i7) आणि इंडेक्स 2 (i5) (VP14) | 23 | 5 | 0.3 | |
| वाचा 2 (VP11) | 13 | 2 | 0.3 | |
|
S1 आणि S2 100/200/300 चक्र |
वाचा 1 (VP10) | 24 | 4 | 0.3 |
| इंडेक्स 1 (i7) आणि इंडेक्स 2 (i5) (VP14) | 23 | 5 | 0.3 | |
| वाचा 2 (VP11) | 13 | 2 | 0.3 | |
|
S4 200/300 सायकल |
वाचा 1 (VP10) | 24 | 7.3 | 0.3 |
| इंडेक्स 1 (i7) आणि इंडेक्स 2 (i5) (VP14) | 23 | 5 | 0.3 | |
| वाचा 2 (VP11) | 13 | 3.5 | 0.3 |
NovaSeq X/X Plus
NextSeq™ 1000/2000 सिस्टमवर TELL-Seq™ रन सेट करणे
नेक्स्टसेक™ 1000/2000 अभिकर्मक कार्ट्रिजमध्ये दोन सानुकूल विहिरी आहेत (1 आणि 2, दोन्ही रिक्त आहेत) जेव्हा लायब्ररीला किमान एक सानुकूल प्राइमर आवश्यक असेल तेव्हा वापरल्या जातील. हे प्रत्येक सानुकूल विहिरीसाठी दोन सानुकूल प्राइमर्स (पूल) पर्यंत समर्थन देते. रीड प्राइमर आणि इंडेक्स प्राइमर वेगवेगळ्या विहिरींमध्ये असणे आवश्यक आहे.
TELL-Seq™ लायब्ररींना सर्व रीडसाठी (वाचा 1, वाचन 2, अनुक्रमणिका 1 आणि अनुक्रमणिका 2) सानुकूल प्राइमर्स आवश्यक आहेत. जेव्हा फक्त TELL-Seq™ लायब्ररी एका रनमध्ये अनुक्रमित केल्या जातात
- TELL-Seq™ रीड 1 आणि 2 प्राइमर वाचा एकत्र करा: प्रत्येक सानुकूल रीड प्राइमर मिक्स सौम्य करण्यासाठी HT1 वापरा 600 µM अंतिम एकाग्रतेवर 0.3 µl मिळवा, म्हणजे, 1.8 µM TELL-Seq™ 100 µl आणि 1 µM 1.8 µl रीड करा. µM TELL-Seq™ 100 μl HT2 मध्ये 597 प्राइमर वाचा. सानुकूल विहिरीमध्ये लोड करा 1.
- TELL-Seq™ इंडेक्स 1 आणि इंडेक्स 2 प्राइमर्स एकत्र करा: प्रत्येक सानुकूल इंडेक्स प्राइमर मिक्स सौम्य करण्यासाठी HT1 वापरा 600 µM अंतिम एकाग्रतेवर 0.6 µl मिळवा, म्हणजे, 3.6 µM TELL-Seq™ चे 100 µl आणि प्राइम 1µm TELL-Seq™ इंडेक्स. µM TELL-Seq™ इंडेक्स 3.6 प्राइमर 100 μl HT2 मध्ये. ते सानुकूल विहिरीमध्ये लोड करा 593.
- खालीलप्रमाणे क्रमवारी रन सेट करताना योग्य सानुकूल प्राइमर निवडा:
- 1 वाचा: सानुकूल 1
- अनुक्रमणिका 1: सानुकूल 2
- अनुक्रमणिका 2: सानुकूल 2
- 2 वाचा: सानुकूल 1
जेव्हा PhiX लायब्ररी TELL-Seq™ लायब्ररीसह एका रनमध्ये अनुक्रमासाठी वापरली जातात
- नेक्स्टसेक 1000/2000 रीड प्राइमर किट मिळवा (कॅटलॉग# 20046117)
TELL-Seq™ रीड 1 आणि 2 प्राइमर्स HP21 मध्ये एकत्र करा: 600 µM अंतिम एकाग्रतेसाठी प्रत्येक कस्टम रीड प्राइमर मिक्स 21 µl HP0.3 मध्ये जोडा, म्हणजे, 1.8 µM TELL-Seq™ रीड 100 µ1 µ1.8 प्राइमर आणि 100 µl. µM TELL-Seq™ 2 μl HP597 मध्ये 21 प्राइमर वाचतो. सानुकूल विहिरीमध्ये लोड करा 1.- TELL-Seq™ इंडेक्स 1 आणि इंडेक्स 2 प्राइमर्स एकत्र करा: प्रत्येक सानुकूल इंडेक्स प्राइमर मिक्स सौम्य करण्यासाठी HT1 वापरा 600 µM अंतिम एकाग्रतेवर 0.6 µl मिळवा, म्हणजे, 3.6 µM TELL-Seq™ चे 100 µl आणि प्राइम 1µm TELL-Seq™ इंडेक्स. µM TELL-Seq™ इंडेक्स 3.6 प्राइमर 100 μl HT2 मध्ये. ते सानुकूल विहिरीमध्ये लोड करा 593.
- खालीलप्रमाणे क्रमवारी रन सेट करताना योग्य सानुकूल प्राइमर निवडा:
- 1 वाचा: सानुकूल 1
- अनुक्रमणिका 1: सानुकूल 2
- अनुक्रमणिका 2: सानुकूल 2
- 2 वाचा: सानुकूल 1
जेव्हा ड्युअल इंडेक्स इलुमिना लायब्ररी एका रनमध्ये TELL-Seq™ लायब्ररीसह अनुक्रमित केली जातात
- नेक्स्टसेक 1000/2000 रीड अँड इंडेक्स प्राइमर किट मिळवा (कॅटलॉग# 20046115)
- TELL-Seq™ रीड 1 आणि 2 प्राइमर्स HP21 मध्ये एकत्र करा: 600 µM अंतिम एकाग्रतेसाठी प्रत्येक कस्टम रीड प्राइमर मिक्स 21 µl HP0.3 मध्ये जोडा, म्हणजे, 1.8 µM TELL-Seq™ रीड 100 µ1 µ1.8 प्राइमर आणि 100 µl. µM TELL-Seq™ 2 μl HP597 मध्ये 21 प्राइमर वाचतो. सानुकूल विहिरीमध्ये लोड करा 1.
- BP1 मध्ये TELL-Seq™ इंडेक्स 2 आणि इंडेक्स 14 प्राइमर्स एकत्र करा: 600 µM अंतिम एकाग्रतेसाठी प्रत्येक कस्टम इंडेक्स प्राइमर मिक्स 14 µl BP0.6 मध्ये जोडा, म्हणजे, 3.6 µM TELL-Seq™ चे 100 µl आणि प्राइम 1µr 3.6µm निर्देशांक. µM TELL-Seq™ इंडेक्स 100 प्राइमर 2 μl BP593 मध्ये. ते सानुकूल विहिरीमध्ये लोड करा 14.
- खालीलप्रमाणे क्रमवारी रन सेट करताना योग्य सानुकूल प्राइमर निवडा:
- 1 वाचा: सानुकूल 1
- अनुक्रमणिका 1: सानुकूल 2
- अनुक्रमणिका 2: सानुकूल 2
- 2 वाचा: सानुकूल 1
कागदपत्रे / संसाधने
 |
युनिव्हर्सल सिक्वेन्सिंग TELL-Seq लायब्ररी [pdf] वापरकर्ता मार्गदर्शक TELL-Seq लायब्ररी, TELL-Seq, लायब्ररी |
